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Benvenuti al Novus serie protocollo di Visual.
In questo video potrete imparare a eseguire tutte le fasi di fluorescenza
immunocitochimica utilizzando i metodi più comuni per questo dosaggio.
Prima di iniziare la procedura di ICC,
dimostreremo come preparare vetrini e piastre di colture cellulari
seguita dalla placcatura delle nostre cellule.
Cominciamo da acido trattamento coprioggetto nuovi un molare di acido cloridrico per
24 ore.
Dopo decantazione off attentamente l'acido e rimuovere i vetrini,
laviamo ciascuno con acqua distillata,
poi un risciacquo finale con etanolo.
Come passaggio facoltativo è possibile posizionare i coprioggetti immergere in un rack di sottostrato
in 0,1 mg / ml di soluzione di gelatina o polilisina
per cinque minuti.
Questi rivestimenti aiutante nel fornire ulteriore aderenza delle cellule al
coprioggetti assicurare che non si staccano durante successive fasi di lavaggio.
Dopo il trattamento rimuovere il rack sottostrato e asciugare i vetrini nella cultura
cappuccio o un forno riscaldato.
Coprioggetti puliti asciutti vengono quindi inseriti in ciascun pozzetto di una cultura ben sei
piastra
e coperto con un coperchio.
Per risparmiare tempo, grandi quantità di piatti possono essere preparati in anticipo per un uso successivo.
Le piastre possono essere sterilizzati con il loro vincolo luce UV della cappa.
Con coprioggetti pulite preparate in sei pozzetti, ora possiamo aggiungere le nostre cellule.
Platted qui in cellule aggiungere una densità di mezzo milione di cellule per pozzetto.
Le cellule vengono poi coltivate durante la notte in incubatrice o fino a che raggiungano la vostra preferita
densità.